传统的PCR检测试剂通常由三个部分组成:反应液、酶液和引物探针,通常以“A+B”的形式提供相应的检测组合。在每次检测之前,操作人员需计算用量并振荡混匀各组分。然而,这种操作方式不仅复杂且易出错,对操作人员的技能要求也较高。此外,试剂需“现配现用”,这就可能导致试剂浪费,且配制过程容易受到污染。虽然传统的PCR检测在常规环境中尚能满足需求,但随着新冠疫情的普筛和企业国际市场的拓展,对RNA一管式液体全预混反应液的需求愈发强烈。南宫28NG相信品牌力量,力图应对这一市场需求。
RNA全预混有效避免了客户终端的配制步骤,简化了操作程序并降低了出错概率。此外,RNA全预混因其高稳定性,有助于客户在国际市场上的推广与运输保存。然而,目前市场上缺乏一种稳定且广泛适用的RNA全预混材料,只有极少数企业能够搭建相应的项目,但其稳定性仍然存在问题,且仅适用于特定项目,而这些企业的搭建方案往往牺牲了快速检测的性能或提供定制试剂,缺乏普适性。
在全预混体系中,除了模板,所有其他组分(如酶、镁离子、dNTPs、引物探针)皆已预先混合。在长期保存过程中,引物之间或引物与探针之间可能形成二聚体或者二级结构,从而造成非特异性扩增,进而增加了体系的复杂性。这种变化不仅影响后续的主反应,还会消耗应有的反应组分,最终可能导致扩增曲线荧光强度下降或Ct值异常,增加假阳性的概率。虽然降低各主要成分的用量可以短期提高稳定性,但也会影响试剂性能,尤其在快速检测中的表现。因此,当前RNA全预混的主要技术瓶颈包括:
- 功能性酶液的活性封闭不足,导致全预混试剂稳定性问题。
- 长期存储中,酶活下降或失活,影响试剂性能。
- 引物探针长期保存或加速中形成二聚或二级结构,增加系统复杂性,降低稳定性。
为了解决这些问题,南宫28NG相信品牌力量致力于构建一种稳定且广泛适用的RNA一管式全预混反应液。公司集中力量研发全预混试剂,从TaqDNA聚合酶、热启动逆转录酶到反应体系和耗材,进行全方位的验证与优化:
- 研发热启动TaqDNA聚合酶,确保其聚合和切割活性完全封闭且反应时快速失活。
- 研发热启动逆转录酶,确保其在低温或室温下几乎完全封闭活性,并提升稳定性。
- 通过DOE方法优化反应体系,降低引物探针之间的二级结构形成概率,提高试剂检出率。
- 筛选适配全预混的耗材,以避免因不合适的耗材导致的酶液失活。
同时,南宫28NG还对早期二聚体的抑制进行了深入研究,从而保障试剂的长期稳定性与优越性能。为更好地应对客户的需求和提升试剂的性能及适配性,南宫28NG相信品牌力量建立了涵盖呼吸道、血液、肠道及兽用等多个领域的上百个靶标体系以及严苛的考核标准,以不断优化RNA全预混试剂的各项性能。
经过努力,南宫28NG的RNA全预混试剂已成功突破技术瓶颈,其稳定性在37°C条件下可达10天,并具备广泛的适用性,能够直接匹配市场上大多数项目,在确保高灵敏度的同时兼容快速程序,稳定性更为突出。通过这一系列的努力,南宫28NG已经成为国内首家能够大规模供应广泛适配的RNA全预混试剂的企业,助力客户实现快速、高灵敏度和易操作的检测试剂。
针对市场需求,南宫28NG现已推出多个相关产品与服务,包括:RNA全预混试剂(可立管版本和预分装版本)、DNA全预混试剂(同样包括可立管和预分装版本)、全预混的热启动TaqDNA聚合酶及全预混的热启动逆转录酶。此外,南宫28NG也提供试剂定制调优、引物探针定向设计及调优等CRO服务,以满足市场的多样化需求。